EUCAST 多黏菌素耐药性检测方法及文献综述

编者按：华人抗菌药物敏感性试验委员会（ChiCAST）是欧洲临床微生物和感染病学会（ESCMID）欧洲药敏试验委员会（EUCAST）下设在中国的药敏委员会，该委员会于 2017 年 3 月成立，委员来自中国两岸三地、欧洲、美国，专家领域涵盖临床微生物学、临床感染病学、临床药理学、畜牧兽医学、抗菌药物制药企业及感染诊断企业。委员会下设临床细菌学组、临床真菌学组、临床药理学组、临床感染学组及畜牧兽医学组等亚专业组。主要任务为药敏试验相关内容（如方法学、折点等）标准化，开展有价值的药敏相关临床研究，对有争议的临床标本检测进行确认和鉴定，建立 ChiCAST 网站，传播 EUCAST 文件，开展国际间合作与交流，开展临床微生物实验室标准化培训和宣传教学，促进我国抗菌药物敏感性试验工作的健康发展。

以下为大家带来《 EUCAST 多黏菌素耐药性检测方法及文献综述》。

供稿：

宁永忠 ( ChiCAST委员、清华大学附属垂杨柳医院 )

王瑶 ( ChiCAST学术部秘书、北京协和医院 )

审校：

程敬伟（ChiCAST 学术部秘书、首都医科大学附属北京友谊医院）

赵颖（ChiCAST 学术部秘书、北京协和医院）

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2013 年《EUCAST 临床和/或流行病学重要细菌耐药机制和特殊耐药性检测指南》第一版发布。2017 年 7 月 EUCAST 发布了升级版（version 2.0）。下载网址：

http://www.eucast.org/fileadmin/src/

media/PDFs/EUCAST_files/Resistance_

mechanisms/EUCAST_detection_of_

resistance_mechanis-ms_170711.pdf

该指南介绍了多黏菌素耐药性检测。这一章一开始为如下表格，和 CPE、AmpC 不一样——有感控目的、公共健康目的，药敏试验分类需要写的均是 yes。直接检测多黏菌素耐药性，与折点比较，确定 RIS 结果。

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多黏菌素是「老药」，染色体介导耐药早有报道。2015 年第一次报道质粒介导耐药——MCR-1。欧洲侵袭性肺炎克雷伯菌，整体多黏菌素耐药率为 8.6%；耐碳青霉烯类菌株中，则高达 29%。可见多重耐药的概率较高。

目前耐药性检测方法，主要是微量肉汤稀释法。其他方法——扩散法、梯度稀释法都不可信——极严重错误（Very Major Errors, VME）和主要错误（Major Errors, ME）都较高。近期发现 MCR-1 酶是锌离子依赖，可以预期基于 EDTA 或二吡啶酸抑制的检测方法，不过目前还没有成熟的检测方法。测试时需要质控菌株——E. coli NCTC 13846 (mcr-1 阳性)，其黏菌素 MIC 为 4 mg/L，偶尔在 2 或 8 mg/L。

EUCAST 折点文件 v8.0 中，肠杆菌科折点是>2 mg/L 为耐药。铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的折点相同。目前 CLSI M100 文件中，肠杆菌科没有黏菌素、多黏菌素的折点，附录 A 里有肠杆菌科非野生株复核的建议。鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌黏菌素折点都是 ≤ 2 mg/L 为敏感；≥ 4 mg/L 为耐药。在鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌的说明中，有一条说明：唯一认可的方法是微量肉汤稀释法，不可以用纸片扩散法、梯度稀释法（Etest）——与 EUCAST 建议相同。

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多黏菌素/黏菌素药敏检测方法文献综述如下：

✔ 韩国的研究比较了 Vitek 2、MicroScan、Etest 和琼脂稀释法 ( 参考方法 ) 测试血流感染分离的 213 株不动杆菌属细菌对黏菌素的敏感性。Vitek 2、Etest 的分类一致性 ( categorical agreement, CA )均为 99.1%，MicroScan 为 87.3%（鲍曼不动杆菌为 95.7%）。按：该结果表明 Etest 测试不动杆菌结果可以接受。( J Clin Microbiol. 2013 Jun;51(6):1924-6.)

✔ 新加坡的研究比较了 Sensititre、MicroScan、Vitek 2、Etest 与微量肉汤稀释法 BMD（≤ 2 mg/L 为折点），测试 CRE 对黏菌素、多黏菌素 B 的敏感性。76 株 CRE 中，包括 21 株 mcr-1+菌株。黏菌素：Vitek 2、Sensititre、Etest 基本一致率（essential agreement, EA）是 93.4%、89.5%、75.0%；多黏菌素 B：96.1%、96.1%、48.7%。与 MIC 成正比，且分类一致性 CA >90% 者，是 Vitek 2（多黏菌素 B）、Sensititre（黏菌素和多黏菌素 B）。黏菌素用 Vitek 2 测试，VME 达 36%。Etest 正比相关性低，黏菌素和多黏菌素 B 的 VME 分别为 12% 和 26.1%。按：仪器法对肠杆菌科较好，Etest 结果不太好。( J Clin Microbiol. 2017 Sep;55(9):2609-2616.)

✔ 希腊的研究在比较快速多黏菌素 NP 试验的同时，比较了 BD Phoenix、Vitek 2 和 Etest 三种方法。收集 131 株肺炎克雷伯菌，其中 98 株对黏菌素耐药。而这 98 株中，95 株是 CRKP，75 株 mgrB+，没有 mcr。快速多黏菌素 NP 试验检出敏感性是 99%，1 株假阴性，6 株假阳性。BD Phoenix、Vitek 2 和 Etest 漏掉了 5、2 和 3 株耐药菌，敏感性分别为 95%、98% 和 97%。按：不同基因型检测效果可能不同。（J Microbiol Methods. 2018 Aug 22. pii: S0167-7012(18)30581-5.）

✔ EUCAST 研究通过国际合作收集 72 株临床分离的对黏菌素具有不同程度耐药性的菌株，包括 14 株大肠埃希菌、18 株肺炎克雷伯菌、21 株铜绿假单胞菌和 22 株不动杆菌属细菌。以标准微量肉汤稀释法为对照方法，评价了 7 种商品化 MIC 检测系统对黏菌素药敏检测结果的准确性。基本一致率( essential agreement, EA )：Sensititre ( Thermo Fisher Scientific ) 为 96%，MICRONAUT-S ( Merlin Diagnostika ) 为 96%，MICRONAUT MIC-Strip ( Merlin Diagnostika ) 为 99%，SensiTest (Liofilchem) 为 88%，UMIC (Biocentric) 为 82%，Etest (bioMérieux) 为 75%-84%（取决于使用的培养基），MTS (Liofilchem) 为 59%-75%（取决于使用的培养基）。所有被评价微量肉汤稀释法系统均对敏感和非敏感株给出了正确结果。纸片扩散法不能用于检测黏菌素敏感性，不能区分敏感和耐药株。现有的梯度稀释法低估了黏菌素 MIC 值，低估了耐药性，即便质控结果在控也应避免使用。（Clin Microbiol Infect. 2018 Aug;24(8):865-870.）

✔ 综上可知，目前仪器法测试黏菌素/多黏菌素 B 的文献证据不多，彼此不太一致，又涉及菌种和基因型，略有委曲。期待未来进一步深入研究。

综上，多黏菌素耐药这一章对临床实验室过筛、检测该耐药表型，提供了一些信息。大家可以在实际工作中借鉴、应用、验证。相信会有不同表型结果、或难以解释的表型表现，可以进一步讨论、或用分子方法深入研究。目前只认同微量肉汤稀释法，其他方法不推荐。仪器检测需要进一步积累证据。

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