ChiCAST视点
编者按：华人抗菌药物敏感性试验委员会（ChiCAST）是欧洲临床微生物和感染病学会（ESCMID）欧洲药敏试验委员会（EUCAST）下设在中国的药敏委员会，该委员会于 2017 年 3 月成立，委员来自中国两岸三地、欧洲、美国，专家领域涵盖临床微生物学、临床感染病学、临床药理学、畜牧兽医学、抗菌药物制药企业及感染诊断企业。委员会下设临床细菌学组、临床真菌学组、临床药理学组、临床感染学组及畜牧兽医学组等亚专业组。主要任务为药敏试验相关内容（如方法学、折点等）标准化，开展有价值的药敏相关临床研究，对有争议的临床标本检测进行确认和鉴定，建立 ChiCAST 网站，传播 EUCAST 文件，开展国际间合作与交流，开展临床微生物实验室标准化培训和宣传教学，促进我国抗菌药物敏感性试验工作的健康发展。
以下为大家带来《结核分枝杆菌的 katG、rpoB、rpsL 耐药基因研究》。
供稿：
李晓波、辜依海（ChiCAST 委员，陕西省汉中市 3201 医院）
审校：
肖 盟（ChiCAST 学术部秘书，北京协和医院）
我国结核病患者居世界第二位 [1]。 结核分枝杆菌对异烟肼（INH）、利福平（RFP）与链霉素（SM）耐药情况越来越多见。
我们采用分离培养与 DNA 测序法对结核分枝杆菌临床分离株进行检测，探讨其耐 INH、RFP 和 SM 的耐药分子机制。收集三二 0 一医院疑似肺结核病住院患者晨痰 500 份，按照全国结核病诊断细菌学检验规程标准 [2] 进行分离培养、分别采用生化反应和 WHO 推荐的 L-J 培养基比例法进行鉴定和药敏试验。
结果分析使用 GENtle Align 系统将测序结果与标准结核分枝杆菌 H37Rv 基因序列进行比对，分析突变位点统计结果。
500 份痰液中分离出 62 例结核分枝杆菌。INH 耐药率为 56.5%（35/62）、RFP 耐药率为 43.5%（27/62）、SM 耐药率为 40.3%（25/62）。
在耐单一药物中，以耐异烟肼为首位。INH、RFP、SM 高浓度耐药分别为 37.1%（13/35）、70.3%（19/27）、88%（22/25）。
在 35 株 INH 耐药株中，有 25 株发生 katG 基因突变，katG 基因突变率为 81.0%。AGC→ACC（Ser→Thr）在 315 位点突变 20 株（57.1%）；AGC→GGC（Ser→Gly）在 315 位点突变 1 株（2.9%）；CTG→CCG（Arg→Leu）在 463 位点突变 4 株（11.4%）。
有 10 株（28.5%）未发生基因突变。27 株 RFP 耐药株中，22 株发生氨基酸突变，5 株 (18.5%) 未发生突变，rpoB 基因突变率为 81.5%。TCG→TTG（Ser→Leu）在 531 位点突变 15 株（55.6%）；CAC→CTC（His→Leu）在 526 位点突变 6 株（22.2%）；CTG→CCG（Leu→Pro）在 533 位点突变 1 株（3.7%）。
25 株 SM 耐药株中， 19 株发生 rpsL 基因突变，6 株（24%）未发生基因突变。rpsL 基因突变率为 81.3%。AAG→AGG（Lys→Arg）在 43 位点突变 18 株（72%）。AAG→AGG（Lys→Arg）在 88 位点突变 1 株（4%）。
本研究中 INH、RFP、SM 耐药率分别为 56.5%（35/62）、43.5%（27/62）、40.3%（25/62），表明 INH 耐药率在所有一线抗结核药当中是最高的。10 株未发生突变与常规药敏实验不符，说明 INH 耐药性的产生可能还有其它耐药机制或常规药敏实验有误差。95% 以上的结核菌对 RFP 的耐药性的产生是因为编码该酶β亚基的 rpoB 基因发生改变所致 [3-6]。
本研究中 27 株 RFP 耐药株密码子 TCG→TTG 在 531 位点突变 15 株，CAC→CTC 在 526 位点突变 6 株，CTG→CCG 在 533 位点突变 1 株，与常规药敏实验相符。rpsL 基因 43 位和 88 位氨基酸密码子突变是结核分枝杆菌耐 SM 的主要分子机制。本研究中耐 SM 结核分枝杆菌临床分离株有 76% 发生 rpsL 基因突变。
总之，通过测序技术对 INH、RFP 和 SM 耐药基因的检测，表明其虽具有准确，特异性， 敏感性高的优点，且耐药特点与基因突变情况基本符合，但依然不能 100% 预测药敏表型，必须结合药敏试验。
