ChiCAST视点
编者按：华人抗菌药物敏感性试验委员会（ChiCAST）是欧洲临床微生物和感染病学会（ESCMID）欧洲药敏试验委员会（EUCAST）下设在中国的药敏委员会，该委员会于 2017 年 3 月成立，委员来自中国两岸三地、欧洲、美国，专家领域涵盖临床微生物学、临床感染病学、临床药理学、畜牧兽医学、抗菌药物制药企业及感染诊断企业。委员会下设临床细菌学组、临床真菌学组、临床药理学组、临床感染学组及畜牧兽医学组等亚专业组。主要任务为药敏试验相关内容（如方法学、折点等）标准化，开展有价值的药敏相关临床研究，对有争议的临床标本检测进行确认和鉴定，建立 ChiCAST 网站，传播 EUCAST 文件，开展国际间合作与交流，开展临床微生物实验室标准化培训和宣传教学，促进我国抗菌药物敏感性试验工作的健康发展。
以下为大家带来《血培养阳性瓶直接快速抗菌药物敏感性试验（RAST）的抑菌圈直径折点》。
供稿：
冯羡菊（ChiCAST 委员、郑州大学第一附属医院）
范 欣（ChiCAST 学术部秘书，首都医科大学附属北京朝阳医院）
审校：
杨启文（ChiCAST 常务委员、秘书长，北京协和医院）
本文件应引用为 「欧洲抗菌药物敏感性试验委员会。血培养阳性瓶直接快速抗菌药物敏感性试验（RAST）的抑菌圈直径折点1.0 版，2018 年.http：//www.eucast.org。」
★ 目录 ★
|
01 |
注释 |
|
02 |
技术不确定区的信息 |
|
03 |
质量控制 |
|
04 |
大肠埃希菌 |
|
05 |
肺炎克雷伯菌 |
|
06 |
铜绿假单孢菌 |
|
07 |
金黄色葡萄球菌 |
|
08 |
粪肠球菌 |
|
09 |
屎肠球菌 |
|
10 |
肺炎链球菌 |
注释
1. EUCAST 快速抗菌敏感性试验（RAST）抑菌圈直径折点表用于判定采用 EUCAST 快速药敏方法检测所获得的结果。
2. 折点仅适用于规定的菌种和孵育时间，不适用于表中未包括的菌种和/或孵育时间。
3. EUCAST 快速药敏折点将药敏结果判为以下两类：
-
S -敏感，标准给药方案：菌株被判为「敏感，标准给药方案」意味着临床上使用该药标准给药方案时治疗成功的可能性高。
-
R-耐药：菌株判为「耐药」意味着即使给药量增加，治疗失败的可能性仍然很高。
4. 对于所有菌种-药物组合，由于孵育时间较短，敏感性菌株和耐药性菌株之间的分离情况较差，因此存在不能判定区。EUCAST 已将此区域命名为技术不确定区（Area of Technical Uncertainty, ATU）。它对应分类不确定的抑菌圈直径区间。更多有关 ATU 以及如何处理快速药敏中的 ATU 结果的信息请参考单独的页面/表格。
如何处理血培养阳性瓶直接快速药敏检测的技术不确定性
技术不确定区（ATU）通常为 1-3 mm 的抑制区直径范围。所有菌种-药物组合用 EUCAST 快速药敏方法时都存在 ATU。 ATU 代表药敏判定结果（S，I 和 R）不确定的区域。在此区域中， S，I 和 R 的判定错误率较高。因此，ATU 结果不建议进行敏感性判定。通常，孵育时间越短，归类为 ATU 的结果越多。用快速药敏方法判定为 S 和 R 的结果可以报告。
在 ATU 时该怎么办？ ATU 内的测量值无法判定。只能报告明确归属于 S 和 R 类别的结果。当出现（1）无法准确读取的抑菌圈直径或（2）测量值落在 ATU 区的情况时，请直接留白，不报告药敏结果分类。在 10 分钟内重新孵育，然后在 6 小时（如果需要的话也可以是 8 小时）之后读取结果。如果 8 小时后仍然无法获得完整结果，请使用 EUCAST 标准方法进行纸片扩散法药敏试验。
我们建议实验室在阳性血培养瓶直接药敏报告中加入一条注释，解释当时为什么某些结果为空白。注释可以是：「直接从阳性血培养瓶中进行抗菌药物敏感性测试，通常在 4、6 和/或 8 小时后读取结果，要求仅报告可信的结果。因此，在短时间孵育后药敏报告中的空白结果可能会在后期进行补充。」
接种质控菌株血培养瓶快速药敏方法的质控标准
EUCAST 建议每天常规进行标准药敏方法质量控制，以保证药敏试验的试剂及标准化纸片扩散法的过程的质量。
表中所列三个 QC 菌株是用于检查快速药敏试验的过程——直接从血培养瓶接种平板进行纸片扩散法试验， 孵育 4、6 和 8 小时。当实验室进行血培养快速药敏试验、培训新员工、血培养系统或系统内有任何其他变化时，需要进行质量控制。
将 1 mL 浓度为 100-200 CFU/mL（0.5 麦氏浊度， 1:100 000 稀释）的 QC 菌悬液加入到血培养瓶中，再加入约 5 mL 无菌血液。接种瓶置于血培养系统进行孵育，报阳后根据 RAST 方法进行处理。
大肠埃希菌 ATCC 25922
金黄色葡萄球菌 ATCC 29213
肺炎链球菌 ATCC 49619
大肠埃希菌
|
阳性血培养瓶（BCB）EUCAST 直接快速纸片扩散法 |
|
|
培养基 |
Mueller-Hinton（MH）琼脂 |
|
接种物 |
100-150 μL 阳性血培养液 |
|
孵育条件 |
空气培养，35±1 ºC |
|
孵育时间 |
4、6 和 8小时 |
|
读取 |
去掉培养基盖，在光线充足条件下，深色背景下，读取抑菌圈直径。 |
注释：产 ESBL 或碳青霉烯酶菌株的筛查折点尚未得到验证。表中列出的折点是临床折点。耐药株或在 ATU 中的菌株可疑为 β- 内酰胺酶介导的耐药。
肺炎克雷伯菌
|
阳性血培养瓶（BCB）EUCAST 直接快速纸片扩散法 |
|
|
培养基 |
Mueller-Hinton（MH）琼脂 |
|
接种物 |
100-150 μL 阳性血培养液 |
|
孵育条件 |
空气培养，35±1 ºC |
|
孵育时间 |
4、6 和 8小时 |
|
读取 |
去掉培养基盖，在光线充足条件下，深色背景下，读取抑菌圈直径。 |
注释：产 ESBL 或碳青霉烯酶菌株的筛查折点尚未得到验证。表中列出的折点是临床折点。耐药株或在 ATU 中的菌株可疑为 β- 内酰胺酶介导的耐药。
铜绿假单胞菌
|
阳性血培养瓶（BCB）EUCAST 直接快速纸片扩散法 |
|
|
培养基 |
Mueller-Hinton（MH）琼脂 |
|
接种物 |
100-150 μL 阳性血培养液 |
|
孵育条件 |
空气培养，35±1 ºC |
|
孵育时间 |
6 和 8 小时 |
|
读取 |
去掉培养基盖，在光线充足条件下，深色背景下，读取抑菌圈直径。 |
金黄色葡萄球菌
|
阳性血培养瓶（BCB）EUCAST 直接快速纸片扩散法 |
|
|
培养基 |
Mueller-Hinton（MH）琼脂 |
|
接种物 |
100-150 μL 阳性血培养液 |
|
孵育条件 |
空气培养，35±1 ºC |
|
孵育时间 |
4、6 和 8小时 |
|
读取 |
去掉培养基盖，在光线充足条件下，深色背景下，读取抑菌圈直径。 |
注释：
1. 具体解释参考现行版本 EUCAST 临床折点表（标准方法）中的筛选试验注释。
2. 诱导性克林霉素耐药性试验：克林霉素和红霉素纸片间距 ≤ 12 mm（两纸片边缘之间）。 在 6 和 8 小时后观察 「D」形抑菌环。阳性结果是可信的，但阴性结果不能保证没有诱导耐药性。 注：对于标准克林霉素敏感性试验，需单独贴克林霉素纸片（红霉素纸片的活性可能会干扰标准克林霉素敏感性测试的读数）。
粪肠球菌
|
阳性血培养瓶（BCB）EUCAST 直接快速纸片扩散法 |
|
|
培养基 |
Mueller-Hinton（MH）琼脂 |
|
接种物 |
100-150 μL 阳性血培养液 |
|
孵育条件 |
空气培养，35±1 ºC |
|
孵育时间 |
4、6 和 8小时 |
|
读取 |
去掉培养基盖，在光线充足条件下，深色背景下，读取抑菌圈直径。 |
注释：
1. 粪肠球菌对氨苄西林耐药情况罕见，应通过 MIC 试验进行验证。氨苄西林、阿莫西林和哌拉西林加或不加β内酰胺酶抑制剂的敏感性可以通过氨苄西林敏感性推断。
2. 具体解释参考现行版本 EUCAST 临床折点表（标准方法）中的筛选试验注释。
3. 快速药敏难以区分模糊或锋利的抑菌圈边缘。利用快速药敏表中列出的折点可以检测由 vanA 引起的万古霉素耐药性，折点，但可能遗漏了一些 vanB 介导的耐药性。
屎肠球菌
|
阳性血培养瓶（BCB）EUCAST 直接快速纸片扩散法 |
|
|
培养基 |
Mueller-Hinton（MH）琼脂 |
|
接种物 |
100-150 μL 阳性血培养液 |
|
孵育条件 |
空气培养，35±1 ºC |
|
孵育时间 |
4、6 和 8小时 |
|
读取 |
去掉培养基盖，在光线充足条件下，深色背景下，读取抑菌圈直径。 |
注释：
1. 具体解释参考现版本 EUCAST 临床折点表（标准方法）中的筛选试验注释。
2. 快速药敏难以区分模糊或锋利的抑菌圈边缘。利用快速药敏表中列出的折点可以检测由 vanA 引起的万古霉素耐药性，折点，但可能遗漏了一些 vanB 介导的耐药性。
肺炎链球菌
|
阳性血培养瓶（BCB）EUCAST 直接快速纸片扩散法 |
|
|
培养基 |
Mueller-Hinton 苛养菌（MH-F）琼脂 |
|
接种物 |
100-150 μL 阳性血培养液 |
|
孵育条件 |
CO2 孵育，35±1 ºC |
|
孵育时间 |
4、6 和 8小时 |
|
读取 |
去掉培养基盖，在光线充足条件下读取抑菌圈直径。 |
注释：
1. 对于对苯唑西林敏感的分离株，报告所有 EUCAST 临床折点表（标准方法）中有折点的β-内酰胺类药物（包括注释中的药物）为「敏感」。对于苯唑西林耐药的分离株，警惕β-内酰胺类的耐药性，并进行标准药敏测试。
2. 具体解释参考现行版本 EUCAST 临床折点表（标准方法）中的筛选试验注释。
3. 诱导性克林霉素耐药性试验：克林霉素和红霉素纸片间距 ≤ 12 mm（两纸片边缘之间）。 在 6 和 8 小时后观察 「D」形抑菌环。阳性结果是可信的，但阴性结果不能保证没有诱导耐药性。 注：对于标准克林霉素敏感性试验，需单独贴克林霉素纸片（红霉素纸片的活性可能会干扰标准克林霉素敏感性测试的读数）。
