ChiCAST视点
编者按：华人抗菌药物敏感性试验委员会（ChiCAST）是欧洲临床微生物和感染病学会（ESCMID）欧洲药敏试验委员会（EUCAST）下设在中国的药敏委员会，该委员会于 2017 年 3 月成立，委员来自中国两岸三地、欧洲、美国，专家领域涵盖临床微生物学、临床感染病学、临床药理学、畜牧兽医学、抗菌药物制药企业及感染诊断企业。委员会下设临床细菌学组、临床真菌学组、临床药理学组、临床感染学组及畜牧兽医学组等亚专业组。主要任务为药敏试验相关内容（如方法学、折点等）标准化，开展有价值的药敏相关临床研究，对有争议的临床标本检测进行确认和鉴定，建立 ChiCAST 网站，传播 EUCAST 文件，开展国际间合作与交流，开展临床微生物实验室标准化培训和宣传教学，促进我国抗菌药物敏感性试验工作的健康发展。
以下为大家带来《EUCAST 产孢丝状真菌微量肉汤稀释法体外抗真菌药物敏感试验方法简介及与 CLSI 方法比较》。
供稿：
赵 颖（ChiCAST 学术部秘书 北京协和医院）
审校：
范 欣（ChiCAST 学术部秘书 首都医科大学附属北京朝阳医院）
由于真菌感染易复发或治疗失败，以及某些菌种可能存在天然耐药或获得性耐药，无法通过菌种鉴定预测对药物的敏感性，因此临床需要进行抗真菌药物敏感试验（Antifungal susceptibility testing, AFST）。同时 AFST 对于耐药监测、流行病学研究以及新药和已有抗真菌药物的体外活性比对也十分重要。但是对于大多数临床微生物实验室来说，丝状真菌体外抗真菌药物敏感试验都是一个难点，很多同行对于如何标准的进行丝状真菌药敏实验都非常困惑。欧洲抗菌药物敏感试验委员会 (EUCAST) 对于产孢的丝状真菌肉汤稀释法体外抗真菌药物敏感性试验提供了标准的操作规范 [1]。
最新的 EUCAST 微量肉汤稀释法体外药敏的操作规范文件 DEFINITIVE DOCUMENT E.DEF 9.3.1 包含了更多的具体操作的细节描述，更新了分光光度计的准备和校准部分，但删除了质控菌株的 MIC 范围（此部分内容独立成为一个新的文件，可在 EUCAST 网站 http://www.EUCAST.org 获取）。
丝状真菌的体外抗真菌药物敏感性试验的影响因素非常多，因此，实验室人员应该重视试验条件，包括耗材选购、接种物制备和接种量、培养时间和温度以及培养基配方等各个方面：
真菌微量肉汤稀释法药敏试验应在平底微孔板中进行。初步数据表明采用组织处理与非组织处理的微孔板进行试验会得到不同的 MIC 值（未发表的数据）。此外，不同的塑料类型也可能会影响药物结合，进而影响 MIC 值。在大多数情况下，由 EUCAST 委员会创建的基于 MIC 分布的 ECOFF 和折点，建立在使用组织处理（tissue-treated）的微孔板来进行试验，每孔加入 100μL 抗真菌药物工作溶液，再加入 100μL 接种物的基础上。
与美国临床和实验室标准协会（CLSI）最新的关于丝状真菌微量肉汤稀释法药敏实验方法 M38 3rd ed [2] 相比，二者在抗真菌药物储备液配制，制备倍比稀释的抗真菌药物工作液，制备含抗真菌药物工作液的 96 孔板及保存，制备标准浓度的接种物，接种物接种至含抗真菌药物的 96 孔板，孵育温度及时间，结果判读及解释等细节都进行了描述，二者对比见表 1。
表 1 EUCAST 产孢丝状真菌肉汤稀释法体外抗真菌药物敏感试验方法与 CLSI 丝状真菌肉汤稀释法体外抗真菌药物敏感试验方法比较
（点击图片可查看大图）
从上表中可见 EUCAST 和 CLSI 对于丝状真菌的体外抗真菌药敏试验大体上相似，但一些细节方面二者略有差异。各实验室可根据自身具体情况参照其中任何一种方法进行试验，注意各文件中对应于细节的描述，严格按照其进行操作，确保获得准确的试验结果，从而能更好的获得丝状真菌对抗真菌药物敏感性的准确数据，帮助临床医生选择合适的抗真菌药物治疗和进行耐药性监测。
[参考文献]
[1] The Subcommittee on Antifungal Susceptibility Testing (AFST) of the ESCMID European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). EUCAST DEFINITIVE DOCUMENT E.DEF 9.3.1. Method for the determination of broth dilution minimum inhibitory concentrations of antifungal agents for conidia forming moulds. 2017
[2] Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI). Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi.3rd ed. CLSI standard M38. Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, Pennsylvania, 2017.