ChiCAST视点
以下为大家带来《血培养快速药敏（RAST）之 EUCAST 和 CLSI 解读》。
供稿：
廖全凤，康 梅（四川大学华西医院实验医学科临床微生物实验室）
审校：
赵 颖，杨启文（北京协和医院检验科）
随着抗菌药物耐药性的提高，快速抗菌药敏测试（rapid antimicrobial susceptibility testing，RAST）变得越来越重要，尤其是针对血流感染（bloodstream infection，BSI）的患者，快速而准确的药敏对于其治疗至关重要。 但是，传统的药敏（AST）方法在血培养报阳后至少 2 天才能完成， 而针对血培养的 RAST 方法可以明显缩短 AST 时间，研究表明 RAST 和适当的早期治疗可以改善 BSI 和败血性休克的临床结局 [1-2]。据此，欧洲药敏试验委员会（EUCAST）和美国临床与实验室标准化研究所（CLSI）于 2019 年和 2021 年分别发布了针对血培养的快速药敏检测方法。两个国际组织公布的方法均可被临床微生物实验室评价和使用。
现将两个标准为大家做一个比较分析：
EUCAST[3-4] 方法
适用于对血培养分离出的肠杆菌目细菌进行 RAST。报阳后 8 h 内取出血培养瓶，颠倒混匀 5-10 次，消毒瓶顶部后用 20 号注射器吸取 4 滴培养物到 MH 平板（Mueller–Hinton ager）上，同时加种一个血琼脂平板用以鉴别待测菌的纯度，均匀涂布 MHA 后 15 min 内将抗菌药物纸片（目前 CLSI 方法只支持氨苄西林、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松、妥布霉素和复方新诺明）贴到平板上，35±2°C 空气环境孵育 16-18 h 后读取结果。结果判读：根据血平板判断是否为纯菌落，同时鉴定菌种，如果待测菌是肠杆菌目细菌，使用 CLSI-M10031st 的折点判读，如果不属于肠杆菌目，则不解释或报告结果。菌落不纯或者生长不良时，可纯化后执行标准药敏试验。天然耐药的情况下即使存在抑菌环，仍然报告为耐药。如果抑菌圈内有菌落，应检测纯度，如果是纯菌则应测量内直径。
EUCAST 组织欧洲 55 个实验室做了 RAST 评估，与参考方法微量肉汤稀释法的一致率可达 90.0%[3-4]。
CLSI 发布的血培养 RAST 方法与微量肉汤稀释法的符合率为 90.0% 左右 [7]， CLSI 推荐的 RAST 方法覆盖了血培养肠杆菌目细菌，可在报阳后 16-18 h 内出具菌株对氨苄西林、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松、妥布霉素和复方新诺明的药敏结果。
EUCAST 发布的 RAST 检测谱更广，可在 4-8 h 内完成血培养常见分离菌株（大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌）对临床常用药物的敏感性检测。
与传统的血培养初步药敏试验相比，RAST 将其规范化和标准化，明显缩短了检测和报告时间，可为脓毒血症病人提供更快速的病原学药敏信息，值得各个临床微生物实验室摸索和推广。
表 1 CLSI 和 EUCAST 的血培养 RAST 比较
EUCAST RAST 操作 SOP 文件链接：
https://www.eucast.org/rapid_ast_in_blood_cultures/methods/
EUCAST RAST 药敏折点文件链接：
https://www.eucast.org/rapid_ast_in_blood_cultures/breakpoints_for_short_incubation/
1、血培养快速药敏实验对于临床脓毒血症患者而言意义重大，可能挽救病人生命，临床微生物实验室应在此领域摸索和规范化，不断提高实验室的感染病诊断能力和用药指导能力。
2、EUCAST 在血培养快速药敏的标准化领域起步较早，目前适用的菌种以及药物均较多，已经积累了一定的经验。今年 CLSI 也开始重视 RAST，推出了肠杆菌目细菌对于 6 种抗菌药物的 RAST 方法，但遗憾的是没有包含重症败血症病人中较常用的碳青霉烯类药物，期待明年可以增加适用菌种和重要抗菌药物。
3、实验室在启动血培养 RAST 临床流程前务必要仔细阅读相应的 SOP 文件，因为大家可能注意到了虽然药敏平板和接种量相似，但 EUCAST 和 CLSI 的药敏纸片含量以及选用的折点是有差异的，因此实验室务必在开展 RAST 检测前了解这些差异以确保操作和报告的准确性。
华人抗菌药物敏感性试验委员会（ChiCAST）是欧洲临床微生物和感染病学会（ESCMID）欧洲药敏试验委员会（EUCAST）下设在中国的药敏委员会，该委员会于 2017 年 3 月成立，委员来自中国两岸三地、欧洲、美国，专家领域涵盖临床微生物学、临床感染病学、临床药理学、畜牧兽医学、抗菌药物制药企业及感染诊断企业。委员会下设临床细菌学组、临床真菌学组、临床药理学组、临床感染学组及畜牧兽医学组等亚专业组。主要任务为药敏试验相关内容（如方法学、折点等）标准化，开展有价值的药敏相关临床研究，对有争议的临床标本检测进行确认和鉴定，建立 ChiCAST 网站，传播 EUCAST 文件，开展国际间合作与交流，开展临床微生物实验室标准化培训和宣传教学，促进我国抗菌药物敏感性试验工作的健康发展。
参考文献
1、 Buehler SS, Madison B, Snyder SR et al. Effectiveness of practices to increase timeliness of providing targeted therapy for inpatients with bloodstream infections: a laboratory medicine best practices systematic review andmeta-analysis. Clin Microbiol Rev 2016; 29: 59–103.
2、 Rhodes A, Evans LE, Alhazzani W et al. Surviving Sepsis Campaign: international guidelines fo management of sepsis and septic shock: 2016. Crit Care Med 2017; 45: 486–552.
3、 Jonasson E, Matuschek E, Kahlmeter G. The EUCAST rapid disc diffusion method for antimicrobial susceptibility testing directly from positive blood culture bottles. J Antimicrob Chemother. 2020 Apr 1; 75(4):968-978.
4、 Åkerlund A, Jonasson E, Matuschek E, Serrander L, Sundqvist M, Kahlmeter G; RAST Study Group. EUCAST rapid antimicrobial susceptibility testing (RAST) in blood cultures: validation in 55 European laboratories. J Antimicrob Chemother. 2020 Nov 1; 75(11):3230-3238.
5、 CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 31st ed. CLSI supplement M100. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2021.
6、 CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests. 13th ed. CLSI standard M02. Clinical and Laboratory Standards Institute; 2018.
7、 Chandrasekaran S, Abbott A, Campeau S, Zimmer BL, Weinstein M, Thrupp L, Hejna J, Walker L, Ammann T, Kirn T, Patel R, Humphries RM. Direct-from-Blood-Culture Disk Diffusion To Determine Antimicrobial Susceptibility of Gram-Negative Bacteria: Preliminary Report from the Clinical and Laboratory Standards Institute Methods Development and Standardization Working Group. J Clin Microbiol. 2018 Feb 22; 56(3):e01678-17.